DNA序列測定分手工測序和自動測序，手工測序包括sanger雙脫氧鏈終止法和maxam-gilbert化學降解法。自動化測序實際上已成為當今 dna序列分析的主流。美國pe abi公司已生產出373型、377型、310型、3700和3100型等dna測序儀，其中310型是臨床檢測實驗室中使用*多的一種型號。 1．bigdye測序反應試劑盒 主要試劑是bigdye mix，內含pe**四色熒光標記的ddntp和普通dntp，amplitaq dna polymerase fs，反應緩沖液等。
2．pgem-3zf (+) 雙鏈dna對照模板 0.2g/l，試劑盒配套試劑。
3．m13(-21)引物 tgtaaaacgacggccagt，3.2μmol/l，即3.2pmol/μl，試劑盒配套試劑。
4．dna測序模板 可以是pcr產物、單鏈dna和質粒dna等。模板濃度應調整在pcr反應時取量1μl為宜。本實驗測定的質粒dna，濃度為0.2g/l，即200ng/μl。
5．引物 需根據(jù)所要測定的dn**段設計正向或反向引物，配制成3.2μmol/l，即3.2pmol/μl。如重組質粒中含通用引物序列也可用通用引物，如m13(-21)引物，t7引物等。
6．**去離子水或三蒸水。
7．0.2ml或和0.5ml的pcr管 蓋體分離，pe公司產品。
8．3mol/l 醋酸鈉(ph5.2) 稱取40.8g naac·3h2o溶于70ml蒸餾水中，冰醋酸調ph至5.2，定容至100ml，高壓**后分裝。
9．70%乙醇和無水乙醇。
10．naac/乙醇混合液 取37.5ml無水乙醇和2.5ml 3mol/l naac混勻，室溫可保存1年。
11．pop 6測序膠 abi產品。
12．模板抑制試劑(tsr) abi產品。
13．10×電泳緩沖液 abi產品。
14．abi prism 310型全自動dna測序儀。
15．2400型或9600型pcr儀。
16．臺式冷凍高速離心機。
17．臺式高速離心機或袖珍離心機。
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