DNA序列測定分手工測序和自動測序，手工測序包括sanger雙脫氧鏈終止法和maxam-gilbert化學(xué)降解法。使用DNA測序儀實(shí)際上已成為當(dāng)今dna序列分析的主流。 那么這里談一談DNA測序兩種測序方法的原理：
（1）化學(xué)修飾法測序原理
化學(xué)試劑處理末段DNA片段，造成堿基的特異性切割，產(chǎn)生一組具有各種不同長度的DNA鏈的反應(yīng)混合物，經(jīng)凝膠電泳分離。化學(xué)切割反應(yīng)：包括堿基的修飾修飾的堿基從其糖環(huán)上轉(zhuǎn)移出去在失去堿基的糖環(huán)處DNA斷裂。
（2）Sanger法測序的原理
就是利用一種DNA聚合酶來延伸結(jié)合在待定序列模板上的引物。直到摻入一種鏈終止核苷酸為止。每一次序列測定由一套四個單獨(dú)的反應(yīng)構(gòu)成，每個反應(yīng)含有所有四種脫氧核苷酸三磷酸(dNTP)，并混入限量的一種不同的雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基團(tuán)，使延長的寡聚核苷酸選擇性地在G、A、T或C處終止。終止點(diǎn)由反應(yīng)中相應(yīng)的雙脫氧而定。每一種dNTPs和ddNTPs的相對濃度可以調(diào)整，使反應(yīng)得到一組長幾百至幾千堿基的鏈終止產(chǎn)物。它們具有共同的起始點(diǎn)，但終止在不同的的核苷酸上，可通過高分辨率變性凝膠電泳分離大小不同的片段，凝膠處理后可用X-光膠片放射自顯影或非同位素標(biāo)記進(jìn)行檢測。
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